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細胞培養(yǎng)中出現(xiàn)黑點是污染嗎?如何處理?
一旦您在細胞培養(yǎng)的過程中發(fā)現(xiàn)有黑點生成，首先，要肉眼觀察培養(yǎng)基是否混濁，然后，在鏡下觀察培養(yǎng)細胞生長的狀態(tài)，黑點是否游動。如果細胞被污染，微生物則會大量繁殖，培養(yǎng)基就會迅速變黃、變混濁。污染包括細菌污染、支原體污染等。
如果在鏡下觀察細胞，生長狀態(tài)良好，與黑點出現(xiàn)前相比，沒有任何變化，那么，黑點的出現(xiàn)可能與以下幾種情況有關：
(1)細胞生長過老，破碎的細胞殘骸;
(2)血清質(zhì)量不好，反復凍融的結果;
(3)配制培養(yǎng)基的pH值偏高，不宜細胞生長;
(4)配制培養(yǎng)基的水質(zhì)、容器不合格。可應用離心、過濾的方法去除這些黑點;
(5)培養(yǎng)原代細胞中出現(xiàn)小黑點，可能是原代組織中的雜質(zhì)，多次傳代可以消除。
細胞培養(yǎng)中如何防止黑點生成?
(1) 盡可能地減少血清凍融次數(shù)。
(2) 培養(yǎng)基無需37℃水浴。
(3) 培養(yǎng)基保持*PH值7.0- 7.2。
(4) 嚴格控制配制培養(yǎng)基的水質(zhì)，容器定期刷洗。
(5) 掌握細胞傳代的*時機，細胞切勿生長過老。
小牛血清和胎牛血清有何區(qū)別與注意事項?
血清保存和使用須注意：血清應保存在-5℃至-20℃，若存放在4℃不可超過一個月。解凍血清時 ，應先將血清至于2-8℃冰箱，并經(jīng)常搖勻使之溶解，然后至室溫放置使之升溫，不可將冷凍的血清直接放入37℃水浴或者溫箱中，如放在37℃解凍，顏色加深，粘稠度也會增加，血清在解凍和熱滅活后，應按用量分裝并于-20℃保存，避免反復凍融。
胎牛血清，小牛血清和新生牛血清三種之間的區(qū)別：
這三種血清的成份，總體沒有什么明顯差別，只是有一些成分與其生存環(huán)境有關，如上述有人說的抗體等很少。此外，因生長發(fā)育的需要，有些成分在小牛出生后會發(fā)生一些變化。不過還沒有搞清楚它與其它的血清之間的差別。有一點可以肯定，胎牛血清中的部分功能蛋白與小牛血清中的含量有差別。
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